生化培養箱在多管發(fā)酵法注意事項

生化培養箱在多管發(fā)酵法注意事項
     1．培養溫度的要求總大腸菌群中的細菌除生活在腸道中外，在自然環(huán)境中的水與土壤中也經(jīng)常存在，但此等在自然環(huán)境中生活的大腸菌群培養的zui合適溫度為25℃左右，如在37℃培養則仍可生長(cháng)，但如將培養溫度再升高至44．5℃，則不再生長(cháng)，而直接來(lái)自糞便的大腸菌群細菌，習慣于37℃左右生長(cháng)，如將培養溫度升高至44．5℃仍可繼續生長(cháng)。因此，可用提高培養溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區分，兩種方法也都基于此理。將接種好的樣品或裝有濾膜的培養基放入生化培養箱時(shí)，箱內溫度一定要達到所要求的溫度（44.5±0.5℃）時(shí)，方可放入。如用恒溫水浴箱時(shí)，其水面要高于接種物面，放濾膜的培養皿要沉到水浴箱底部。
　　2．加氯水樣的處理經(jīng)氯處理消毒過(guò)的水樣，水中含有一定量的余氯，使大腸菌群處于受損或受抑制狀態(tài)，在采集水樣時(shí)應提前在采樣瓶中加硫代硫酸鈉，硫代硫酸鈉可以脫氯，使受損的細菌得以復蘇與修復，從而避免出現計數結果偏低甚至假陰性的現象。此外余氯對濾膜法培養的細菌其抑制作用尤為明顯，所以抽濾時(shí)應對水樣進(jìn)行大量無(wú)菌水稀釋?zhuān)詼p少余氯的殘留。

　　3．樣品的保存采樣用的容器使用前應蓋好瓶蓋，用牛皮紙將瓶蓋和瓶頸處包裹好，置干燥箱160℃-170℃干熱滅菌2h，或用高壓蒸汽滅菌器121℃滅菌15min。采樣后水樣的正確保存也很重要，如保存不當可使樣品中的大腸菌群細菌死亡或在一定條件下再生長(cháng)，這些都將影響檢測結果的準確性。檢測室接到水樣后，應立即檢測，如因故不能檢測時(shí)，應立即將樣品置于冰箱內（2℃-10℃）并于2小時(shí)內檢測。

　　4．培養物質(zhì)的制備與保存

       （1）.濾膜法所采用的M-FC培養基多使用外購的成品，培養基中苯胺藍的純度和質(zhì)量往往影響菌落的顏色，因此，無(wú)菌包裝的成套培養基在使用前，先接種典型糞大腸菌，以觀(guān)察對比菌落的顏色，來(lái)鑒定其穩定性。
       （2）.多管發(fā)酵法所使用的培養液在分裝于各發(fā)酵管中后，應將發(fā)酵管盡快放于高壓蒸汽滅菌器中，在115℃滅菌20min（注意：這個(gè)溫度也應控制好，既達到滅菌的作用，還要防止培養物質(zhì)分解流失），然后貯存于冰箱或暗處備用。

　　5．結果統計

　?、?多管發(fā)酵法的結果是根據不同接種量的發(fā)酵管所出現陽(yáng)性結果的數目，從MPN表中查得相應的MPN指數，來(lái)計算每升水中糞大腸菌群細菌的MPN值。MPN是“MostProbableNumber”的縮寫(xiě)，指zui大可能數，它是根據統計學(xué)理論，估計水體中的菌群密度和衛生質(zhì)量的一種方法，所以準確判斷不同接種量發(fā)酵管的陽(yáng)性數是非常重要的，否則將導致較大偏差。

　?、?濾膜法的結果是計數濾膜上呈藍或藍綠色的菌落，來(lái)計算出每升水樣中的糞大腸菌群數。所以為便于計數，減少誤差，理想的水樣體積是一片濾膜上生長(cháng)20-60個(gè)糞大腸菌群菌落。